冷凍切片機的使用方式以及注意事項

　　組織切片技術(shù)是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域中的重要技術(shù)，主要有石蠟切片、震動切片和冰凍切片等技術(shù)。其中冰凍切片技術(shù)的應(yīng)用越來越廣泛，其優(yōu)點就是快速、便捷，且能較完整的保存抗原活性，如細胞的某些抗原成分，特別細胞膜抗原，受體抗原，酶及肽類抗原在石蠟切片的處理過程中，不可避免的受到破壞或失去抗原活性，而且對于原位分子雜交等核酸探針雜交實驗，冰凍切片技術(shù)也成為切片技術(shù)。

　　儀器的操作系統(tǒng)主要由總開關(guān)、操縱面板1、操縱面板2、手輪和冷凍箱組成。總開關(guān)控制儀器的供電，儀器開機運行后，無特殊原因不要關(guān)閉總開關(guān)，若由于斷電或其他原因關(guān)閉總電源后，則必須要對冷凍箱及其附件進行除菌和干燥處理后才能重新啟動儀器。

　　2 操縱面板1主要控制冷凍箱照明、溫度、除霜、時間設(shè)定等功能，并顯示切片厚度、切片模式等信息。

　　溫度調(diào)節(jié)包括箱體溫度(CT)和樣品頭溫度(OT)，OT溫度設(shè)定可比CT略高。不同的組織選用不同的溫度進行切片，過高或過低的溫度均會影響切片的質(zhì)量，表1中是一些常用組織的參考切片溫度，具體采用的溫度還需操作者在實踐中進行摸索。除霜是冰凍切片機每天均需進行的操作，用于除去儀器運行過程中，箱體內(nèi)部產(chǎn)生的霜。LeicaCM3050S具有三種除霜模式：箱體自動除霜、箱體手動除霜和樣品頭手動除霜模式。箱體自動除霜每24小時自動進行一次，具體時間可以人為設(shè)定(最好設(shè)定在00:00左右)，除霜結(jié)束后儀器自動降溫到設(shè)定值。自動除霜時程的默認設(shè)置是8分鐘，如果儀器長時間使用后，除霜8分鐘無法使箱體解凍，可以通過增加除霜時程來解決。箱體手動除霜和樣品頭手動除霜模式可以通過選擇手動除霜鍵來進行(一般不使用)。

　　3 操縱面板2主要控制電動切片、樣品頭升降、切片厚度和修片厚度。電動切片有三種模式：間歇模式、連續(xù)模式和單次模式。電動切片速度可以手動調(diào)節(jié)，電動切片的開啟和中斷可以手控或者通過腳踏板控制。樣品頭升降主要用來調(diào)節(jié)樣品和刀片之間的距離，具有粗調(diào)和細調(diào)兩種模式。

　　4 儀器使用后的操作。日常使用后需進行一些處理：將OT設(shè)為0℃，CT設(shè)為-10℃,這樣既可以延長壓縮機的壽命又利于除霜過程的進行;取出刀片并進行除菌、干燥以備下次使用;清除箱體中的切片廢棄物;取出未使用的組織樣本另行保存;鎖定手輪和控制面板1。長時間不使用儀器可以將總開關(guān)關(guān)閉，但箱體和所有有關(guān)切片的附件均需進行除菌和干燥處理。

　　5 包埋劑的使用。包埋劑主要用于將組織與樣品臺固定在一起，并包被組織以利于展片。包埋劑可選用常見的生理鹽水或PBS等緩沖液，近年來一種混合型包埋劑OCT，使用的越來越廣泛，OCT包埋后，組織切片更加平整。OCT是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，可以直接用于組織包被，也可以對組織進行切片預(yù)處理后再切片。預(yù)處理方法：組織浸蔗糖后放入蔗糖與OCT 1:1體積比的混合液中，室溫2小時;放入OCT中室溫4小時(具體時間視組織大小而定)。

　　冰凍切片機使用注意事項

　　1、開機后速凍臺溫度非常低，請小心操作勿徒手接觸。

　　2、固定樣品時應(yīng)將樣品置于包埋盒底部，避免在進行切片時先要進行長時間的修片損壞磨損切片刀。

　　3、使用刷子掃除多余組織碎片時，請不要刷刀片頂部的刀刃，同時由下到上順著刀面輕刷。

　　4、切片過程中請將冷凍箱窗口留個小縫即可，不可大敞著口進行切片。

　　5、切片完畢后務(wù)必將刀片護刀架放好，將手輪鎖死在12點位置。

　　6、如果切完樣品還有下一位同學(xué)需要用的話，可將機器的速凍臺和冷凍箱溫度調(diào)至-8℃，然后按鎖定鍵，機器即進入待機狀態(tài)。

　　7、每次使用完畢一定要將切片機冷凍箱內(nèi)清理干凈，保持切片機的整潔。同時填寫《儀器使用記錄》，包括“使用日期、實際使用時間、使用者、機器狀態(tài)”。

　　8、如若要對帶有生物危害性的樣品進行切片前，請?zhí)崆芭c儀器負責(zé)人再進行切片。