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徠卡顯微課堂:常溫超薄切片光電關(guān)聯(lián)技術(shù)的應(yīng)用

更新時間:2021-03-15      點擊次數(shù):1575

受徠卡顯微系統(tǒng)生命科學(xué)應(yīng)用部的邀請,2021年1月28日清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心冷凍電鏡平臺的博士后,李英博士,在徠卡網(wǎng)絡(luò)直播平臺講解了生物樣品光電關(guān)聯(lián)技術(shù)的應(yīng)用。




李英,清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心冷凍電鏡平臺博士后,負(fù)責(zé)開發(fā)細(xì)胞電鏡制樣相關(guān)的實驗方法。自2006年以來一直從事電鏡制樣相關(guān)工作,在常溫包埋、免疫標(biāo)記、高壓冷凍制樣、冷凍超薄切片制樣方面有著豐富的經(jīng)驗,自2014年以來服務(wù)的用戶電鏡結(jié)果發(fā)表在Cell、Nature、Nature cell biology等50余篇雜志上。

通過熒光染料、免疫熒光標(biāo)記和遺傳標(biāo)簽等蛋白定位成像工具,光學(xué)顯微鏡可以對細(xì)胞樣品進(jìn)行多色和實時動態(tài)成像,但缺點是由于分辨率的限制,無法顯示細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu);另一方面,電子顯微鏡的圖像分辨率遠(yuǎn)超光學(xué)顯微鏡,卻只能采集靜態(tài)細(xì)胞無熒光標(biāo)記信息的黑白圖像。光電關(guān)聯(lián)技術(shù)(Correlative light and electron microscopy,CLEM)可以將兩種技術(shù)的優(yōu)點整合在一起,應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。


 

李英老師在報告中總結(jié)了當(dāng)前生物樣品光電聯(lián)用技術(shù)的幾種技術(shù)路線,包括冷凍光電關(guān)聯(lián)技術(shù)(Cryo-CLEM)和常溫超薄切片光電關(guān)聯(lián)技術(shù)。其中冷凍光電關(guān)聯(lián)技術(shù)可以把樣品培養(yǎng)或吸附在載網(wǎng)上,光鏡拍攝活細(xì)胞圖像,出現(xiàn)感興趣的現(xiàn)象后采用投入冷凍固定樣品,再進(jìn)行冷凍熒光成像,Cryo FIB (可選)和Cryo ET;其中對于生物組織或細(xì)胞團(tuán)樣品,也可以用高壓冷凍儀進(jìn)行冷凍固定,之后進(jìn)行冷凍超薄切片或Cryo FIB;或者引入Tokuyasu免疫標(biāo)記技術(shù)。


而在常溫CLEM技術(shù)應(yīng)用中,可以采用高壓冷凍和冷凍替代的實驗流程制備生物樣品,選用合適的熒光標(biāo)簽、包埋樹脂、染料和固定液等實驗試劑,實現(xiàn)在熒光顯微鏡和電鏡下觀察同一樣品或同一樣品切片的圖像。





李英老師在生物樣品光電聯(lián)用方面有著豐富的實踐經(jīng)驗,在報告中通過兩個實際案例,講解了培養(yǎng)在光蝕刻共聚焦培養(yǎng)皿上的細(xì)胞使用光電聯(lián)用和連續(xù)切片的實驗過程和結(jié)果,和常溫超薄切片通過Mirror CLEM軟件實現(xiàn)圖像定位和圖像合并的應(yīng)用案例。




在本次技術(shù)講座的后,李英老師介紹了清華大學(xué)蛋白質(zhì)研究技術(shù)中心冷凍電鏡平臺可以提供的生物電鏡制樣和成像服務(wù)范圍,然后回答了直播過程中觀眾的提問。限于時間關(guān)系,部分問題沒有來得及做詳細(xì)解答,觀眾后期也可以聯(lián)系李英老師,歡迎大家進(jìn)行生物電鏡制樣方面的技術(shù)交流!


李英老師的本次技術(shù)講座總結(jié)了生物樣品光電關(guān)聯(lián)技術(shù)的幾種實驗方法,細(xì)致的講解了其中幾種實驗方法的操作流程,還通過具體的實驗案例介紹其中關(guān)鍵的操作細(xì)節(jié),拓展了生物超薄切片用戶的視野,對從事生物電鏡制樣工作的老師有非常好的啟迪意義,是一次珍貴的、高價值的經(jīng)典課程!


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